肉的宰后嫩化有归因于肌原玻璃植物人造纤维机构的损伤，肌原玻璃植物人造纤维机构是由内源性蛋清电离酶分解肌原玻璃植物人造纤维和人体細胞系系骨架蛋清形成的。与二十多年来一种是关注公众号中心点的钙蛋清酶差异，胱天蛋清酶（caspases）之前形成感想象力的情况题。胱天蛋清酶在人体細胞系系凋亡的强制执行过程起着至关比较重要的用处，在这其中caspase-3在去世蛋清电离中的用处是各个面和繁杂的，以至于需要进两步论述方案。S-亚硝基化顺利通过调试钙发出、正能量代谢转化、蛋清质分解和人体細胞系系凋亡来调试色泽，有嫩度和持水性能。中后期论述方案发现了S-亚硝基化能上涨依赖于线粒体的caspase-3级联反映，这机会是健身肌肉人体細胞系系凋亡和鸡肉的质量变迁的缘由。caspase-3的论述方案重中之重是其与人体細胞系系凋亡的问题，因此，少有论述方案探究S-亚硝基化调试caspase-3的机制化。

2024年9月由深圳林果业高校张万刚教学团对在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱怪物为该研究提供了亚硝基化体现组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

繁体中文微信标题：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

期刊论文：Journal of Agricultural and Food Chemistry

2028年影晌成分：5.7

提出的时间：2024年9月

大家厂家：南京农业大学

探索原料：蛋白

拜谱提拱能力：亚硝基化修饰组学

技术工艺路线规划：

一、实验效果

01.Caspase-3吸附性

近些年尚不明了NO对caspase-3的抑制造用反应是不是归因于NO介导的S-亚硝基化，不一样的氧浓度系数的GSNO是外源性NO生产，以介导caspase-3的离体S-亚硝基化。成果证实，与还没有GSNO的组较之，100、200和400μM GSNO组的caspase-3特异性差异性变低（图1），与已经简讯相一致。GSNO治理变低caspase-3特异性的存在主观原因仍尚需阐发。

图1 多种质量浓度的GSNO治理对caspase-3抗逆性的影响力

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化层次

科研Caspase-3的亚硝基化的情况，以具体分析GSNO对Caspase-3的发应性。经GSNO办理后，判断工具到caspase-3核蛋白S-亚硝基化承载力增多（图2）。等因此是因为，外源性GSNO致力于可成就引发caspase-3的身体外S-亚硝基化。最令震惊的是，在是没有GSNO有着的比较组中判断工具到其中一个衰弱的S-亚硝基化带，这是因为caspase-3也许 突发内源性的S-亚硝基化。不但，本科研中caspase-3的S-亚硝基化的情况较高，而caspase-3的抗逆性缩减，这与过后的科研保持一致。因此，caspase-3的特喜欢的人S-亚硝基化装饰位点尚不知道，还必须进这一步的探索世界。

图2 GSNO操作对caspase-3S-亚硝基化技术的直接影响

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化掩盖组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的字段。蓝绿色标注的字段说明S-亚硝基化肽，鲜红色标注的C说明S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱仪

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3挥发结核蛋白

结血清为属于必要的内部骨架血清，在维护肌内部节构的节构完正性和缩水性地方起着必要的作用，研究方案S-亚硝基化caspase-3对结血清可吸附的敏感脆弱性具备着必要必要性。与Std（未用胱天血清酶-3和GSNO孵育的刚开始肌钎维血清）组不同之处，0 μM GSNO组（肌原钎维和caspase-3的孵育，无GSNO）的完正结血清水分盐浓度有效降低，警告caspase-3对结血清具备着潜在性的的血清电离程度。在GSNO孵育后，完正结血清的水分盐浓度很深提高（P < 0.05）。前者，当GSNO盐浓度增高时，完正结血清的水分盐浓度将持续调涨（P < 0.05）（图5）。某些揭示揭示，SNO装饰的caspase-3以总体水平信任的办法促使结血清的可吸附。

图5.S-亚硝基化caspase-3分解结蛋白质

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3分解肌钙蛋白酶-T

肌钙核淀粉酶-T (TnT)是原肌球核淀粉酶改善复杂健身肌肉收缩毛孔的细条的必须肌原黏胶仟维板核淀粉酶。TnT的光溶解基本特征是查重到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化标准下，caspase-3对TnT的光溶解环境如图甲表达6表达，与Std组（中含caspase-3和GSNO的肌原黏胶仟维板）优于，caspase-3组中30 kDa TnT场面重要增强，证实caspase-3组织了TnT的光溶解，不仅如此，caspase-3与GSNO的孵育致使30 kDa TnT以减少。在100和200 μM GSNO组当中不存在查重到清晰的差别(P > 0.05)，而当GSNO的氧浓度达标400 μM 时，该场面重要以减少(P < 0.05)。这样察觉证实了SNO呈现的caspase-3对TnT光溶解的缓和反应。结核淀粉酶和TnT是caspase-3的铭感底物，而GSNO操作减小了caspase-3的抗逆性很有可能致使肌原黏胶仟维板核淀粉酶光溶解层度减小了。结合以上经验，NO诱导型的S-亚硝基化可实现呈现半胱氨酸残基来改善caspase-3的抗逆性，于是进两步不良引响其对结核淀粉酶和TnT的核淀粉酶水解反应能力素质，得以不良引响羊肉品级。

图6. S-亚硝基化caspase- 3降解塑料肌钙血清-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、个人心得体会

本研究分析广泛宣传浅论S-亚硝基化对caspase-3呈现的应响以及其继而对牛羊肉片肌原纤维素板身体外可降解的应响。蛋清S-亚硝基化就可以呈现caspase-3的半胱氨酸残基，然后影响caspase-3吸附性减少，进步骤抑制性了其对牛羊肉片肌原纤维素板蛋清的蛋清水解反应的能力。

三、拜谱总结ppt

研发所采用了酶活测得，亚硝基化绘制组学讲解，WB等验测有效途径，找到血清S-亚硝基化也可以绘制caspase-3的半胱氨酸残基，这影响了caspase-3几丁质酶的调低，齐头并进一部遏制了其对牛羊肉肌原玻纤血清的血清溶解程度。本研发为表达血清质亚硝基化对吃起来的宏观调控机理打造了了个新的画面。

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关联性论文：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663